(1) 取潔凈的血球計數板一塊，在計數室上蓋上一塊蓋玻片。
(2) 將酵母菌液搖勻，用滴管吸取少許，從計數板中間平臺兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴(不宜過多)，使菌液沿兩玻片間自行滲入計數室，勿使產生氣泡，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌液。也可以將菌液直接滴加在計數室上，然后加蓋蓋玻片(勿使產生氣泡)。
(3) 靜置約5分鐘，先在低倍鏡下找到計數室后，再轉換高倍鏡觀察計數。
(4) 計數時用16中格的計數板，要按對角線方位，取左上、左下、右上、右下的4個中格(即100小格)的酵母菌數。如果是25中格計數板。除數上述四格外，還需數中央1中格的酵母菌數(即80小格)。由于菌體在計數室中處于不同的空間位置，要在不同的焦距下才能看到，因而觀察時必須不斷調節微調螺旋，方能數到全部菌體，防止遺漏。如菌體位于中格的雙線上，計數時則數上線不數下線，數左線不數右線，以減少誤差。
(5) 凡酵母菌的芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復分數2-3次(每次數值不應招差過大，否則應重新操作)，取其平均值，按下述公式計算出每毫升菌液所含酵母菌細胞數。 每毫升菌液含菌數＝每小格酵母細胞數×4000×1000×稀釋倍數 。
(6) 血球計數板用后，在水龍頭上用水柱沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網格刻度。洗凈后自行晾干或吹風機吹干
