噬菌體效價(jià)實(shí)驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)材料：

菌株λ噬菌體溶原株 ：Escherichia coli K12 WK 6 λ

λ噬菌體敏感株：Escherichia coli  C600 CR34

培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基；軟瓊脂：肉湯培養(yǎng)基中加入0.5%瓊脂10ml/管

培養(yǎng)條件： NA培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基，37℃

二、實(shí)驗(yàn)步驟：

1.7.5ml 新鮮E.coli λ 菌液離心

2.菌沉淀用1ml無(wú)菌水懸浮

3. 菌懸液加在無(wú)菌平皿中央，開(kāi)皿蓋，在安全柜的紫外燈下照射15秒（0.15mJ/cm2）

4.加入NA培養(yǎng)液5ml

5.37℃暗培養(yǎng)3小時(shí)

6.吸取以上菌液-培養(yǎng)液混合物，加1 - 0.5ml氯仿震蕩后離心12000rpm2分鐘

7.上清十倍稀釋至10-7

8.選擇10-5、10-6、10-7上清稀釋液100ul 與100ul受體菌（CCTCC AB 2013330）混合

9.37℃溫浴20分鐘

10.混合菌液加入到NA軟瓊脂（不燙手）中震蕩混勻倒NA平板

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

1.稀釋度為10-4的平板：布滿噬斑不可數(shù)

2.稀釋度為10-5的平板：噬斑346個(gè)

3.稀釋度為10-6的平板：噬斑37個(gè)

4.稀釋度為10-7的平板：噬斑4個(gè)

 四、實(shí)驗(yàn)建議：

1.噬菌體液體放置在室溫下兩周會(huì)導(dǎo)致數(shù)量下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。

2.宿主菌必須是噬菌體敏感菌株CCTCC AB 2013330，教學(xué)用普通大腸菌和噬菌體溶原菌株不能產(chǎn)生噬菌斑。

3.瓊脂的濃度（1.5%-2.0%），過(guò)高或過(guò)低的瓊脂含量均不能達(dá)到好的效果。

4.噬菌體與細(xì)胞的比例，測(cè)定噬菌體效價(jià)應(yīng)采用低感染復(fù)數(shù)。

5.指示菌密度是在平板上獲得清晰噬菌斑效果的重要因素之一，其細(xì)胞密度不宜過(guò)高。一般控制在1ⅹ107個(gè)細(xì)胞/ml為宜。

圖1. 上一排為平板背面照片，下一排為平板正面照片。