倉鼠卵巢細胞(Lec1)

倉鼠卵巢細胞(Lec1)介紹：Lec1 (原先叫做Pro-5wgaR1 3C,ATCC)是從脯氨酸缺陷型的CHO 克隆Pro-5 中挑選出來的能抗麥芽凝集素的突變株。Lec1 缺乏稱作GlcNAc-T1 的糖基轉移酶，從而N-連接碳水化合物被阻斷在Man5GlcNAc2Asn 中間體。對于研究N-連接糖基化改變對內源糖蛋白或病毒感染、以克隆DNA 轉染產生的糖蛋白的功能和區隔化的影響，這些細胞十分有用。

倉鼠卵巢細胞(Lec1)特性：

1） 來源：倉鼠卵巢

2） 形態：上皮細胞樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存：使用含有優質胎牛血清的2ml 凍存管發送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm 培養皿或者T25 培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

倉鼠卵巢細胞(Lec1)用途：僅供科研使用。

倉鼠卵巢細胞(Lec1)培養步驟

一．倉鼠卵巢細胞(Lec1)培養基及培養凍存條件準備：

1）準備α-MEM 培養基(α-MEM，GIBCO，貨號11900024，添加NaHCO3 1.5g/L，肌醇43.2mg/L, 葉酸8.82mg/L,β-巰基乙醇7.8mg/L)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%完全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO 后進行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。