人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）介紹：人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）對乳汁珠和激活的紅細(xì)胞有吞噬作用，無表面和胞質(zhì)免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化。
1） 來源：急性單核細(xì)胞白血病，單核細(xì)胞
2） 形態(tài)：單核細(xì)胞，懸浮
3） 含量：>1x106
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式
（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；
（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
（3）收到細(xì)胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。
人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）用途：僅供科研使用。
細(xì)胞接收后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4） 貼壁細(xì)胞：在運輸過程中貼壁細(xì)胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。
5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。
6）備注：T25培養(yǎng)瓶運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代 。
人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）培養(yǎng)步驟
一．人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.05 mM β－巰基乙醇；雙抗，1%。
2） 參考傳代比例：傳代時控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細(xì)胞生長至8-10 ×105cell / mL時進行傳代。
3） 參考換液頻率：傳代時換液
4） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
5） 凍存液：完全培養(yǎng)液95%，DMSO 5%（使用該凍存液后，按照我?guī)斓慕?jīng)驗復(fù)蘇存活率約50%，復(fù)蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復(fù)生長）
6） 【注意事項】：
a) 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗以及客戶的反饋，傳代時使用【半換液法】對細(xì)胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進行傳代。同時，您在收到細(xì)胞后，請不要通過離心的方式收集細(xì)胞，可以直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細(xì)胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可。
b) 細(xì)胞對血清質(zhì)量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進口大品牌優(yōu)質(zhì)血清進行培養(yǎng)。
c) 該細(xì)胞的培養(yǎng)液中需添加β-巰基乙醇（細(xì)胞培養(yǎng)級別，可參考細(xì)胞說明書中的品牌、貨號），若不添加，可能會對細(xì)胞狀態(tài)造成影響。
d) 該細(xì)胞對細(xì)胞密度較為敏感，培養(yǎng)、傳代時請注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍（具體請參考細(xì)胞說明書）。
e) 該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低，凍存時請酌情提高細(xì)胞量
ATCC有關(guān)thp-1細(xì)胞保持細(xì)胞活力的說明
https://www.atcc.org/support/faqs/2ed94/Seeding%20density%20for%20TIB-202.aspx?device=modal
（thp-1懸浮細(xì)胞。這些細(xì)胞更喜歡條件培養(yǎng)基和溫和處理，而不是離心和全培養(yǎng)基更換。添加細(xì)胞培養(yǎng)基以稀釋細(xì)胞至維持密度。
頻繁的細(xì)胞計數(shù)是監(jiān)測thp-1的最佳方法。這些細(xì)胞應(yīng)該每2至3天通過向燒瓶中簡單加入少量新鮮培養(yǎng)基（使它們具有條件培養(yǎng)基）來培養(yǎng)。您不需要每次都離心細(xì)胞并重新傳代。當(dāng)在我們的實驗室中培養(yǎng)時，到第2天，細(xì)胞通常可以擴增到具有更多培養(yǎng)基的更大的燒瓶中。當(dāng)細(xì)胞密度達到8×10 5個活細(xì)胞/ ml時需要進行傳代。不允許細(xì)胞密度超過1×10（6）活細(xì)胞/ ml。）
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：傳代時控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細(xì)胞生長至8-10 ×105cell / mL時進行傳代。
3） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。
1，細(xì)胞凍存時，取上清，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入凍存液，輕輕混勻，DMSO終濃度為5%，細(xì)胞密度2x106/支，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
