中國倉鼠卵巢細(xì)胞（懸浮細(xì)胞）（CHO-K1）描述：中國倉鼠卵巢細(xì)胞（懸浮細(xì)胞）（CHO-K1）是源自成年中國倉鼠卵巢深入活體組織切片的CHO細(xì)胞的亞克隆。在本庫通過支原體檢測。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞（懸浮細(xì)胞）（CHO-K1）特性
動(dòng)物種別：中國倉鼠
性別：雌
組織來源：卵巢
形態(tài)：上皮細(xì)胞
細(xì)胞馴化前的培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件：
供應(yīng)限制：僅供研究之用。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞（懸浮細(xì)胞）（CHO-K1）馴化：
復(fù)蘇CHO-K1細(xì)胞轉(zhuǎn)入T25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶，以F12K基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加10%血清培養(yǎng)，待細(xì)胞長滿單層后，加入 0.25 % 胰蛋白酶消化，傳代至裝有完全培養(yǎng)基的T25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶（Corning）中繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞鋪滿瓶底時(shí)，即得貼壁 CHO-K1 細(xì)胞。取貼壁CHO-K1 細(xì)胞，換液，加入15 mL含血清的完全基和 15 mL無血清CHO-K1專用培養(yǎng)基，2天后吸出一半培養(yǎng)液，加入等量的無血清CHO-K1，每2天重復(fù)一次此操作，直到胎牛血清濃度低于 1 %后，以基礎(chǔ)培養(yǎng)基B001 繼續(xù)培養(yǎng)，即培養(yǎng)基中血清濃度依次以 5 %，2 .5 %，1.25%，0.625 %，0 %降低。細(xì)胞在無血清CHO-K1專用培養(yǎng)基中密度達(dá)到5 ×106cells/ mL時(shí)，即得懸浮 CHO-K1 細(xì)胞。培養(yǎng)條件：37℃，5 % CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
運(yùn)輸和保存
可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式
（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；
（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
（3）收到細(xì)胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
細(xì)胞接收后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請?jiān)?/span>10X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。
5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。
6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代 。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞（懸浮細(xì)胞）（CHO-K1）培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備：無血清CHO-K1專用培養(yǎng)基；谷氨酰胺，1%，雙抗，1%，細(xì)胞專用培養(yǎng)基：推薦CHO-K1-001。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90% CHO-K1專用培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
注：第一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
1，細(xì)胞凍存時(shí)，取上清，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
