一、細(xì)胞培養(yǎng)條件
形態(tài)特性：圓形，單個或呈片
生長特性：懸浮 培養(yǎng)體系：1640+10%FBS
傳代方法：1:2-1:3
傳代情況：2~3 天換液/傳代
凍存條件：細(xì)胞庫無血清凍存液
備注：該
細(xì)胞源自一位 14 歲患有 T 淋巴細(xì)胞白血病男性的外周血。
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到 細(xì)胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán) 格無菌操作。鏡下觀察：未超過 80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液移入廢液缸中，懸浮
細(xì)胞需離心處理，加入 6ml 新鮮完全培養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過 80%匯合度 時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見
細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
1）復(fù)蘇
細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養(yǎng)基 混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將 所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6cm 皿中，加入約 6ml 培養(yǎng)基，培 養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹 勻，將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待
細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后 加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，去除上 清，按凍存數(shù)量加入細(xì)胞庫推薦的無血清凍存液。
PS：若客戶收到 2ml 小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用 75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或 安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培養(yǎng)皿，加入 5ml 左右完 全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過 80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)， 視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
