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人肺癌細(xì)胞(A549-LUC)

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞系由 D.J.Griad 通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系,患者為 58 歲白人男性。A549 能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。 該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶 Luc 基因。

1) 來源:肺癌
2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,多角形;貼壁生長
3) 含量:>1x106
4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規(guī)格:T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝
運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式: (1)干冰運輸,收到后 立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80 度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生 長,傳代達到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。 收到細(xì)胞后請拍照,3 天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。
 
細(xì)胞接收后的處理: 1) 收到細(xì)胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì) 胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。 2) 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(4 或 5X 物鏡)下進行,能 準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請在 10X 和 20×物鏡下,同時給剛收 到的細(xì)胞拍照,(10×,20×)各 2-3 張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細(xì) 胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。 3)觀察好細(xì)胞狀態(tài)后, 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。 4) 貼壁細(xì)胞:在運輸過程中貼壁細(xì)胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落 或者脫落后抱團生長,可將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h,然后抽出瓶中 的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞 1000rpm 離心 5 分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照 說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。 5) 懸浮細(xì)胞:T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和 細(xì)胞 1000rpm 離心 5 分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說 明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。 6)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說 明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建 議 1:2 傳代 。
 
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
 
本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1)準(zhǔn)備 F-12K 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度 為 70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二.細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入 37℃水浴中(水面要低 于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有 4mL 培養(yǎng)基的 15ml 離心 管中混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,加入 1mL 培 養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有 5ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。 第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。 對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法: 1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。 2. 加 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部 分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3ml 此細(xì)胞的 培養(yǎng)基終止消化。 3. 輕輕吹打后吸出,移入 15ml 離心管中,在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘, 棄去上清液,加入 1mL 培養(yǎng)液后吹勻。 4. 收到細(xì)胞后首次傳代推薦將細(xì)胞懸液按 1: 2 的比例分到新的含 6ml 培養(yǎng) 基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2 到 1:5 的比例進行。 3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行細(xì)胞凍存。
 
下面 T25 瓶為類;
1,細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2,4min1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入 血清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于 1x10E6/ml, 每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。
3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,至少 2 個小時以后轉(zhuǎn)入 液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
 
注意事項:
1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染, 請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作, 并請注意防護,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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